مراتب سپاس و قدردانی خود را نسبت به زحمات بی دریغ استاد راهنمای ارجمندم جناب آقای دکتر ایرج سعادت، به خاطر تقبل راهنمائی اینجانب، صبر و حوصله فراوان و منابع مفیدی که در اختیار بنده گذاشتند، ابراز می دارم.
راهنمایی‌های ارزشمند، سازنده و زحمات استاد مشاور ارجمندم جناب حمیدرضا کربلایی و دکتر محمد حسین کریمی را در راستای پیشبرد پایان نامه اینجانب ارج می نهم.
چکیده
بررسی ارتباط چند شکلی ژنتیکی ژن هایCAT C-262T وNQO1 C609T
با خطر رد حاد پیوند کلیه
به کوشش
مهسا صحرائیان
پیوند کلیه، درمان انتخابی برای بیماران مبتلا به مرحله نهایی بیماری کلیوی یا End Stage Renal Disease (ESRD) است. در بیماران پیوند کلیه “رد حاد پیوند کلیه” جدی­ترین عارضه محسوب می­ شود که در صورت تشخیص سریع، احتمالا برگشت­پذیر خواهد بود. شواهد زیادی وجود دارد مبنی بر اینکه آسیب اکسیداتیو به عنوان فاکتور مهم در پیدایش و پیشرفت تعدادی از بیماری­ها از جمله سرطان، بیماری­های عصبی، دیابت و بیماری مزمن کلیوی نقش دارد. آنزیم­ های NQO1 و کاتالاز ( CAT) از جمله آنزیم­ های آنتی- اکسیدانت هستند، که از سلول­ها در برابر آسیب اکسیداتیو محافظت می­ کنند. هدف از این مطالعه، بررسی ارتباط چند شکلی ژنتیکی ژن­های CAT C-262TوNQO1 C609T با خطر رد حاد پیوند کلیه می­باشد. در این مطالعه مورد-شاهدی ۲۲۴ فرد سالم به عنوان گروه کنترل و ۲۲۲ نفر بیماران پیوند کلیه شرکت داشتند. از روش PCR-RFLP جهت تعیین ژنوتیپ چند شکلی­های ژنتیکی استفاده کردیم. با توجه به نتایج بدست آمده ارتباط معنی­داری بین فراوانی ژنوتیپ­ها و آلل­های ژن NQO1 در دو جمعیت سالم و بیماران پیوندی مشاهده نشد درنتیجه می ­تواند حاکی از این باشد که فراوانی ژنوتیپی و آللی ژن NQO1 در بروز بیماری­های کلیوی منجر به پیوند کلیه نقشی ندارد. در مورد ژن CAT از مقایسه ژنوتیپ­های ژن کاتالاز در دو جمعیت سالم و بیمار اختلاف معنی­دار فقط در ژنوتیپ CT این ژن مشاهده شد که این عامل می ­تواند در آسیب­های کلیوی که سبب نارسایی شدید کلیه و در نهایت منجر به پیوند می­گردد نقش داشته باشد. (۵۱/۱=OR، ۲۵/۲=۹۵%CI، ۰۴۳/۰=P) همچنین مقایسه فراوانی ژنوتیپی و آللی این دو ژن بین دو گروه بیماران با رد حاد و فاقد رد حاد پیوند انجام شد که در ژن CAT هیچ ارتباط معنی­داری مشاهده نشد. (۰۵/۰<P) و در ژن NQO1 تنها در آلل T این ژن ارتباط در سطح معنی-داری مشاهده گردید. به این معنی که آلل T به میزان ۶۴/۱ برابر خطر رد حاد پیوند کلیه را افزایش می­دهد.

(۶۴/۱ =OR، ۷۳/۲-۹۹/۰ = %۹۵ CI، ۰۵/۰ =P)
کلید واژه: پیوند کلیه، رد حاد پیوند، CAT, NQO1
فهرست مطالب
عنوان صفحه
فصل اول: مقدمه
۱٫۱- پیوند کلیه ۲
۲٫۱- رد پیوند کلیه ۴
۳٫۱- رد حاد پیوند ۴
۴٫۱- DGF 6
۵٫۱- آنتی بادی های ضد HLA 6
۶٫۱- آنتی بادی علیه آنتی ژن های گروه خونی ۷
۷٫۱- افزایش سن اهدا کننده و دریافت کننده پیوند ۷
۸٫۱- اهدا کننده بافت ۸
۹٫۱- استرس اکسیداتیو و آنتی اکسیدانت­ها ۸
۱۰٫۱- کاتالاز ۹
۱۱٫۱- NAD(P)H کوئینون اکسیدوردوکتاز۱ ۱۱
۱۲٫۱- هدف ۱۲
۱۳٫۱- فرضیه ۱۲
عنوان صفحه
فصل دوم: مروری بر تحقیقات پیشین
۱٫۲- مطالعات انجام شده بر روی ژن کاتالاز ۱۴
۲٫۲- مطالعات انجام شده بر روی ژن NQO1 16
۳٫۲- مطالعات پیشین انجام شده در خصوص پیوند کلیه ۱۸
فصل سوم: مواد و روش ها
۱٫۳- نمونه گیری ۲۰
۲٫۳- وسایل مورد نیاز ۲۱
۳٫۳- محلول­های استفاده شده جهت استخراج DNA از نمونه خون کامل ۲۱
۴٫۳- محلول­های استفاده شده جهت استخراج DNA از نمونه بافی­کت ۲۱
۵٫۳- مواد لازم جهت انجام PCR 22
۶٫۳- مواد لازم جهت انجام الکتروفورز ۲۲
۷٫۳- مواد استفاده شده جهت اثر دادن آنزیم محدود­کننده ۲۲
۸٫۳- استخراج DNA از خون محیطی ۲۲
۹٫۳- استخراج DNA از بافی­کت با کیت DNP 23
۱۰٫۳- PCR 24
۱۱٫۳- الکتروفورز ۲۷
۱۲٫۳- رنگ­آمیزی ژل ۲۸
۱۳٫۳- تحلیل آماری ۲۹
عنوان صفحه
فصل چهارم: نتایج
۱٫۴- مشخصات افراد شرکت کننده در این مطالعه ۳۱
۲٫۴- نتایج حاصل از بررسی ریسک فاکتور­های دخیل در رد پیوند کلیه
و مشخصات بیماران ۳۱