۱۰۶×۶/۱

 

۲±۲۲
۲±۲۲

 

۶۰
۶۰

 

۷

 

 

 

سندسموس

 

۱۰۵×۵/۴

 

۷

 

 

 

۳-۴-۳-آزمایش سوم:کشت انبوه C. quadrangula در شرایط نوری و تغذیه­ای مختلف و تعیین اسیدچرب
تیمارهای این آزمایش با توجه به نتایج حاصل از آزمایش اول به­دست­آمد. باتوجه به نتایج به­دست­آمده تیمارهای D6:L6و D12:L12 برای آزمایش کشت انبوه انتخاب­شد. شرایط آماده ­سازی تیمارهای نوری مشابه موارد توضیح­داده­ شده در قسمت ۳-۴-۱ بود. برای انجام آزمایش کشت انبوه از ظروفی با حجم ۱۲۰ لیتر به قطر ۷۰ سانتی­متر استفاده­شد. استوک C. quadrangula برای کشت انبوه در ظروف ۲۰ لیتری تهیه و تحت شرایطی که برای تهیه استوک بیان گردید کشت­داده­شد. حجم زیادی جلبک برای تغذیه C. quadrangula در محیط کشت BBMکشت­شد و به­ صورت متناوب در ارلن­مایرهای ۲ لیتری کشت داده­شد تا غذادهی توسط جلبک­های تازه و در فاز رشد انجام­گیرد. آب مورد استفاده در آزمایش از آب شهر تامین شد و پس از فیلتر کردن و اتوکلاو نمودن (دمای ۱۲۱ درجه سانتی گراد به مدت ۱۵ دقیقه) دو روز قبل از استفاده برای از بین رفتن کلر آب هوادهی شدید صورت می­گرفت. سختی کل آب ۱۳۵ میلی گرم در لیتر از کربنات کلسیم و عاری از هرآلودگی شیمیایی و غیره بود. پس از آماده نمودن ظروف کشت که شامل آبگیری تانک­ها، غذادهی با جلبک­های S. quadricauda و C. vulgaris به ترتیب با غلظت ­های ۱۰۴×۴۵ سلول در هر میلی­لیتر و ۱۰۶×۶/۱ سلول در هر میلی­لیتر در آغاز آزمایش، هوادهی، دمای ۲±۲۲ درجه سانتی ­گراد بود تراکم اولیه به میزان ۱۵۰ فرد در لیتر به هر تانک اضافه­گردید. در طول آزمایش محیط کشت مرتب تمیز و آب هوادهی شده و جلبک تازه به آن وارد می­شد. غذادهی هر دو روز یکبار با جلبک­های S. quadricauda و C. vulgaris با توجه به تراکم کشت برای اطمینان از غذادهی به میزان مازاد نیاز انجام گرفت. به­ طور کلی شرایط کشت مشابه با شرایط کشت آزمایشگاهی رعایت گردید. در سراسر آزمایش هر روز به میزان آب تبخیر شده از تانک­ها آب تازه به آن­ها اضافه می­شد. روی تانک­ها با توری پوشیده­شد تا از ورود و تخم­گذاری حشرات در تانک­ها جلوگیری گردد. حجم کشت انبوه ۸۰ لیتر و­مدت آزمایش ۹۰ روز به­طول انجامید تا میزان نمونه مورد نیاز برای آنالیز اسیدچرب فراهم گردد. نمونه­برداری هر ۷ روز یکبار انجام­گرفت و بعد از هر نمونه­برداری سیفون کردن کف تانک­ها و اضافه­کردن آب تازه انجام می­شد. در طول مدت کشت برای برداشت نمونه جهت انجام آنالیز اسیدچرب، C. quadrangula را سیفون کرده وسپس برای تغلیظ آن­ها از الک (۰۵۳/۰)۲۷۰ میلی­متری استفاده­گردید. نمونه­ها پس از جمع­آوری در اپن­دورف درون فریزر ۲۴- درجه سانتی ­گراد قرارمی­گرفتند. در ۳۰ روز ابتدایی آزمایش سیفون صورت نگرفت تا تراکم جمعیت، میزان رشدویژه و زمان دوبرابر­شدن جمعیت در شرایط کشت انبوه نسبت به کشت آزمایشگاهی ارزیابی شود.
دانلود پایان نامه - مقاله - پروژه
۳-۵- خشک­کردن نمونه­ها و نحوه تعیین اسیدهای­چرب
نمونه­های C. quadrangula پس از جمع­آوری­ برای آنالیز اسیدهای چرب با بهره گرفتن از روش عصاره­گیری ]۲۸[ برای تزریق در کروماتوگرافی گازی آماده­­سازی گردید. جهت خشک کردن نمونه­های زئوپلانکتونی جمع­آوری­شده و به آزمایشگاه شهرک علمی­تحقیقاتی انتقال یافت و از دستگاه خشک­کن انجمادی[۷۷] کمپانی Heto Holten مدل DW8 ساخت دانمارک استفاده­شد. نمونه­های فریزدرای شده تا زمان آنالیز به­وسیله دستگاه گاز کروماتوگرافی، در دیسیکاتور نگهداری شدند.
نمونه­های فریزدرای­شده برای انجام آنالیز اسید چرب به آزمایشگاه مرکز تحقیقات آرتمیا و جانوران آبزی دانشگاه ارومیه منتقل­گردید. برای آنالیز نمونه­ها جهت تعیین میزان اسیدهای چرب از دستگاه گاز کروماتوگرافی، کمپانی Agilent مدل ۷۸۹۰A استفاده­گردید. مراحل آماده ­سازی نمونه­ها برای آنالیز اسیدهای چرب به­ صورت زیر انجام­شد.
از هر یک از نمونه­ها حدود ۵۰ میلی­گرم به لوله­های ۱۵ میلی­لیتری دربدار منتقل شد. مقدار ۱ میلی­لیتر اتانول/ تولوئن (V/V 3:2) به هر لوله اضافه­گردید. سپس ۱/۰ میلی­لیتر محلول استاندارد داخلی (حاوی اسیدچرب C22: 2n-6 حل­شده در ایزواکتان) به هر نمونه افزوده­شد. آنگاه ۱ میلی­لیتر مخلوط تازه تهیه شده استیل کلرید/ متانول (V/V 1:20) به­عنوان عامل استریفیکاسیون به لوله­ها اضافه­گردید. مقداری گاز نیتروژن وارد هر لوله کرده و سپس درب لوله­ها محکم بسته­شد. لوله­ها با بهره گرفتن از یک شیکر دستی به هم زده­شدند وسپس به مدت یک ساعت در درون حمام آب جوش (۱۰۰ درجه سانتی ­گراد) قرارداده­شدند. در طول این مدت هر ۱۰ دقیقه، لوله­ها از حمام آب جوش بیرون آورده­شد و با احتیاط به هم زده­شدند. پس از یک ساعت لوله­ها را سرد کرده و به هرکدام ۱ میلی­لیتر آب مقطر و ۱ میلی­لیتر هگزان اضافه­شد. لوله­ها به مدت ۵ دقیقه با ۳۰۰۰ دور در دقیقه، سانتریفیوژ گردید و قسمت فوقانی (لایه هگزان) به لوله­های ۱۵ میلی­لیتری منتقل شد. عمل سانتریفیوژ پس از افزودن ۱ میلی­لیتر هگزان روی نمونه­ها دوبار دیگر تکرار شد تا زمانی که مطمئن شویم کل اسیدهای چرب به همراه هگزان به لوله­های جدید انتقال داده­شد. محتویات لوله­ها از فیلتر سولفات سدیم عبورداده­شد و به ظروف گلابی شکل از پیش وزن­شده منتقل­گردید. سپس بخش حلال به کمک دستگاه هضم در دمای ۳۵ درجه سانتی ­گراد و با واردکردن گاز نیتروژن، جدا شد و مجدداً وزن گردید. به این صورت مقدار کل متیل استرهای اسیدهای چرب استخراج شده از هر نمونه مشخص گردید. سپس به ظروف کوچک (۲ میلی­لیتری) منتقل گردید و پس از وارد کردن گاز نیتروژن تا زمان آنالیز در فریزر (۲۴- درجه سانتی ­گراد) قرارداده شدند. روز بعد نمونه­ها از فریزر خارج شده و جهت تزریق به دستگاه گاز کروماتوگرافی آماده­شدند و مقدار ۴/۰ میکرولیتر از آن به دستگاه گاز کروماتوگرافی تزریق شد. در نهایت مقدار اسیدهای چرب هر نمونه با مقایسه طول منحنی­های هر اسیدچرب با طول منحنی استاندارد داخلی محاسبه­شد (درصد هر اسیدچرب نسبت به کل اسیدهای چرب تعیین شد) ]۲۸[.
۳-۶- شمارش زئوپلانکتون­ها
شمارش زئوپلانکتون­ها با بهره گرفتن از لام باگاروف[۷۸] صورت­­گرفت. به این نحو که پس از برداشت زیر نمونه از ظروف آزمایش، نمونه­ها به درون لام باگاروف انتقال و پس از آن شمارش با بهره گرفتن از لوپ انجام­می­شد.
۳-۷- محاسبه میزان رشد ویژه و زمان دوبرابر شدن جمعیت
سرعت رشد ویژه جمعیت[۷۹](SGR) با بهره گرفتن از فرمول ارائه ­شده توسط امری و ایکیدا[۸۰] (۱۹۸۴) ]۸۹[ به­ صورت زیر محاسبه­گشت:
SGR= سرعت رشد کلادوسر C.quadrangula، برحسب روز
Nt= جمعیت نهایی C.quadrangula بعد از زمان T
N0= جمعیت اولیه C.quadrangula در آغاز معرفی به محیط­کشت
زمان دوبرابر شدن جمعیت[۸۱] (Dt) را ازطریق فرمول جیمزوال-خارس[۸۲] (۱۹۸۶) ]۵۸[ به شرح زیل مورد محاسبه قرارگرفت:
Dt= زمان دوبرابرشدن جمعیت C.quadrangula
SGR= رشد ویژه جمعیت C.quadrangula بر حسب روز
۳-۸-اندازه ­گیری طول و عرض و وزن
برای اندازه ­گیری طول و عرض C.quadrangula، از نمونه­های فیکس­شده با فرمالین ۵ درصد در آزمایش اول استفاده­شد. از هر تیمار ۳ تکرار برای اندازه ­گیری بالغین و ۳ تکرار برای اندازه ­گیری نوزادان انتخاب و اندازه ­گیری شد. علاوه­بر طول و عرض اندازه ­گیری قطر چشم نیز در بالغین و نوزادان صورت­گرفت. سپس بر اساس فرمول ارائه ­شده توسط دمونت[۸۳] و همکاران ۱۹۷۵، ]۳۰[ وزن C. quadrangula برحسب میکروگرم دبه­دست آمد.
W= 1.70×۱۰-۶ L2.26
۳-۹- تجزیه وتحلیل داده ­ها و آنالیز آماری
داده ­ها با بهره گرفتن از آنالیز واریانس دوطرفه مورد تجزیه آماری قرار­گرفت. تفاوت موجود در بین میانگین­ها با بهره گرفتن از آزمون چند دامنه دانکن با هم مقایسه­گردید. تمام آنالیز­ها با بهره گرفتن از نرم­افزار آماری SPSS, version 16 ]112[ انجام­شد.
فصل چهارم
نتایج و بحث
۴-۱- نتایج
۴-۱-۱- تاثیر رژیم­های نوری و جیره­ های جلبکی متفاوت بر تراکم و رشد ویژه و زمان دوبرابرشدن جمعیت در کشت آزمایشگاهی
نتایج حاصل از آنالیز واریانس دوطرفه تاثیر رژیم­های نوری و جیره­ های غذایی بر تراکم جمعیت، میزان رشد ویژه و زمان دوبرابر شدن جمعیت در طول ۳۰ روز آزمایش در جدول ۴-۱ ارائه ­شده­است. نتایج نشان­داد که رژیم­های نوری و جیره­ های جلبکی اثر معنی­داری را بر موارد یادشده دارا هستند. نتایج نشان داد میانگین بالاترین تراکم، بیشترین میزان رشد ویژه و کوتاه­ترین زمان دوبرابر شدن جمعیت C. quadrangula به­ترتیب برابر ۲۷/۸۰±۰۴/۲۶۱۹ فرد در لیتر، ۰۰/۰±۱۰/۰ فرد در روز و ۰۷/۰±۴۷/۶ روز در رژیم نوری ۱۲ ساعت روشنایی: ۱۲ ساعت تاریکی در تغذیه با جلبک C. vulgaris می­باشد. نتایج حاصل از انجام آزمایش تاثیر دوره های نوری مختلف و دو جیره جلبکی بر تراکم، میزان رشد ویژه و زمان دوبرابر شدن جمعیت C. quadrangula در شکل­های ۴-۱، ۴-۲ و ۴-۳ ارائه گردیده­است. همچنین مقایسه روند تراکم در روزهای آزمایش در تیمارهای نوری و جیره­ های جلبکی در شکل ۴-۴ نمایش­داده­ شده­است.
۴-۱-۲- تاثیر رژیم­های نوری و جیره­ های جلبکی بر تراکم بالغین و نوزادان در جمعیت در کشت آزمایشگاهی
تراکم بالغین و نوزادان در جمعیت زئوپلانکتونی از اهمیت ویژه­ای برخوردار است. نتایج نشان­داد میانگین بالاترین تعداد بالغین در رژیم نوری ۴ ساعت نور:۴ ساعت تاریکی تحت تغذیه با جیره جلبکی C. vulgaris و برابر با ۱۴/۵۷±۱۴/۸۵۷ می­باشد. همچنین میانگین بالاترین تعداد نوزادان در رژیم نوری ۱۲ ساعت نور: ۱۲ ساعت تاریکی و تحت تغذیه با جیره جلبکی C. vulgaris برابر ۹۸/۶۵±۶۲/۲۰۴۷ می­باشد. نتایج حاصل از آنالیز واریانس دوطرفه تاثیر رژیم­های نوری و جیره­ های جلبکی بر تراکم بالغین و نوزادان در جمعیت C. quadrangula در جدول ۴-۱ ارائه­گردیده­است. تراکم بالغین و نوزادان به کل جمعیت تحت رژیم­های نوری و جیره­ های جلبکی در شکل ۴-۵ ارائه شده­است. نتایج نشان می­دهد تیمارهای نوری و جیره­ های جلبکی تاثیر معنی­داری را بر نسبت بالغین و نوزادان در جمعیت دارند.
جدول۴-۱: آنالیز واریانس (Two-Way ANOVA) از اثر رژیم­های نوری (D4:L4، D6:L6، D8:L8، D12:L12) و جیره­ های جلبکی (S. quadricauda و C. vulgaris) بر تراکم جمعیت، میزان رشد ویژه، زمان دوبرابر شدن جمعیت، تراکم بالغین و نوزادان به کل جمعیت در C. quadrangula.

موضوعات: بدون موضوع  لینک ثابت


فرم در حال بارگذاری ...